д

Блог

Jun 03, 2024

д

Nature Microbiology, том 8, страницы 1549–1560 (2023) Цитировать эту статью 4936 Доступов 1 Цитирований 77 Подробности об альтметрических метриках Чтобы исследовать выгодные ниши, избегая при этом угроз, многие бактерии используют

Природная микробиология, том 8, страницы 1549–1560 (2023 г.) Процитировать эту статью

4936 Доступов

1 Цитаты

77 Альтметрика

Подробности о метриках

Чтобы исследовать выгодные ниши, избегая при этом угроз, многие бактерии используют систему навигации по хемотаксису. Несмотря на десятилетия исследований хемотаксиса, большинство сигнальных и сенсорных белков до сих пор неизвестны. Многие виды бактерий выделяют d-аминокислоты в окружающую среду; однако их функция остается в значительной степени непризнанной. Здесь мы обнаруживаем, что d-аргинин и d-лизин являются хемотаксическими репеллентными сигналами для возбудителя холеры Vibrio cholerae. Эти d-аминокислоты воспринимаются одним хеморецептором MCPDRK, котранскрибируемым с ферментом рацемазой, который синтезирует их под контролем сигма-фактора стрессовой реакции RpoS. Структурная характеристика этого хеморецептора, связанного либо с d-аргинином, либо с d-лизином, позволила нам точно определить остатки, определяющие его специфичность. Интересно, что специфичность этих d-аминокислот, по-видимому, ограничена теми ортологами MCPDRK, транскрипционно связанными с рацемазой. Наши результаты показывают, что d-аминокислоты могут формировать биоразнообразие и структуру сложных микробных сообществ в неблагоприятных условиях.

Большинство бактерий могут чувствовать и реагировать на самые разные сигналы, чтобы процветать в меняющейся среде. Одной из таких адаптивных реакций является хемотаксис, с помощью которого подвижные бактерии отслеживают изменения локальных концентраций определенных веществ и инициируют сигнальный каскад, который со временем смещает движение бактерий в сторону благоприятных условий (например, питательных веществ) или в сторону от токсичных соединений1.

Несмотря на существование видоспецифичных компонентов, ядро ​​сигнального пути хемотаксиса состоит из хеморецепторов, известных как метил-принимающие белки хемотаксиса (MCP), адапторного белка CheW, гистидинкиназы CheA и регулятора ответа CheY. У некоторых видов, таких как Escherichia coli, MCP образуют стабильный тройной сенсорный комплекс с CheW и CheA, который обычно группируется на полюсах клеток. При связывании лиганда или других возмущениях окружающей среды MCP меняют конформацию и модулируют активность киназы CheA с помощью CheW. CheA, в свою очередь, фосфорилирует CheY, тем самым позволяя ему связываться с жгутиковым мотором, вызывая вращение по часовой стрелке и, таким образом, переворачивание клеток2,3. Чтобы обеспечить быстрый ответ на хемотаксические стимулы, фосфорилирование CheY может контролироваться специфической фосфатазой4. Хотя основные компоненты передачи сигналов хемотаксиса высоко консервативны среди бактерий и архей, количество и тип хеморецепторов сильно варьируют между видами, и их специфичность остается в значительной степени нехарактерной5,6,7.

По сравнению с E. coli, которая имеет одну хемосенсорную систему и 5 MCP, факультативный возбудитель Vibrio cholerae имеет очень сложную систему хемотаксиса, организованную в три набора хемосенсорных путей (системы Che I/F9, II/F6 и III/F7) и не менее 45 хеморецепторов8. До сих пор было продемонстрировано, что только система II/F6 контролирует моторику9, в то время как функция остальных остается неясной. Было высказано предположение, что большое количество MCP отражает сложность жизненного цикла V. cholerae10; однако, за исключением нескольких входных сигналов (например, L-аминокислот11, таурина12, кислорода13), практически нет информации о лигандной специфичности большинства MCP.

V. cholerae высвобождает миллимолярные концентрации различных d-аминокислот (DAA) в окружающую среду14,15 (рис. 1a). ПППД производятся из их аналогов L-аминокислот (LAA) с помощью рацемазы широкого спектра действия BsrV, которая консервативна у многих видов бактерий14. Эти молекулы регулируют различные клеточные процессы (например, биогенез клеточной стенки16,17, целостность биопленки18,19,20,21, прорастание спор22 или взаимодействие между бактериями15), но в целом физиологическая роль внеклеточных DAA в основном зависит от каждого конкретного d- тип аминокислот и вид бактерий. Известно, что у V. cholerae d-Met и d-Leu модулируют биогенез клеточной стенки, но функция других ПППД неясна.

 1, attractants; CR < 1, repellents; CR = 1, no response. Black diamonds represent the mean of 3 independent biological replicates. Significant differences (unpaired t-test) are indicated by *P < 0.05 or ***P < 0.001. f, Thermal proteome profiling analysis of V. cholerae cell extracts exposed to d-Arg. Stabilized and destabilized proteins in the presence of d-Arg are highlighted in red and green, respectively. From the 45 MCPs found in V. cholerae’s genome (black), only 3 interacted with d-Arg: VC2161, VC1313 and VC1406. g, Chemotactic response of selected MCP candidates to d-Arg. Double mutants (ΔbsrV Δmcp) were constructed and the ability to respond to d-Arg was tested by capillary assays. ΔbsrV strain was used as background. LAA, l-amino acids; DAA, d-amino acids. Black diamonds represent the mean of 3 independent biological replicates. Significant differences (unpaired t-test) are indicated by ***P < 0.001./p> 500 cells). The colour bar represents fluorescence intensity. b, Bottom: growth-phase dependent subcellular localization of sfGFP-MCPDRK. Filled grey circles, OD600  of V. cholerae grown in TB; open tradewind-blue circles, percentage of cells with sfGFP-MCPDRK polar foci. Top: western blot against sfGFP-MCPDRK using anti-GFP-specific antibody at the indicated OD600. Samples were normalized and loaded with equal protein amount. c, Growth curve of V. cholerae grown in MSR6 minimal medium supplemented with 0.04% w/v d-glucose and 0.4% w/v succinate (grey line) at the indicated timepoints. The corresponding percentage of cells with sfGFP-MCPDRK foci (open tradewind-blue circles) is also indicated. Red (glucose depletion) and purple (succinate depletion) arrows indicate carbon starvation. Quantification of % of cells with polar foci in b and c was based on a single experiment where >500 cells were counted from 3 different images per timepoint. d, Left: micrographs showing the expression of sfGFP-MCPDRK in a ΔrpoS mutant background. Representative micrographs of 3 independent replicates are shown; at least 3 images were acquired per timepoint: scale bar, 2 μm. Right: demographic analysis of the fluorescence intensity of sfGFP-MCPDRK relative to cell length. The colour bar represents fluorescence intensity. e, Chemotaxis response of ΔrpoS mutant to d-Arg. Black diamonds represent the mean of 3 independent biological replicates. Error bars represent mean ± s.d. of 3 biologically independent replicates. Significant differences (unpaired t-test) are indicated by ***P < 0.001. f, DAA production by the different strains. Significant differences (unpaired t-test) are indicated by **P < 0.01 or ***P < 0.001./p>50%) cluster together with a BsrV-like racemase (for example, many Vibrio species and Moritella sp.), suggesting coevolution of d-amino acid production and chemotactic recognition. In these orthologues, the d-Arg/d-Lys binding site residues are either fully conserved or have only subtle changes (for example, V. metschnikovii, V. cincinnatiensis and V. anguillarum; see Extended Data Fig. 7). Species with MCPDRK orthologues of slightly lower identity (48–51%) (for example, Aeromonas and Aliivibrio) form a single clade and typically show a substantial change in two important binding site residues: D > S in position 47, resulting in a loss of the salt bridge with the ligand, and W > G in position 107, which removes the stacking interaction with the ligand. Remarkably, in these species, the BsrV-like racemase does not form an operon with the chemoreceptor but is encoded elsewhere in the genome. Finally, the species encoding MCPDRK homologues of lower identity (<45%) (for example, V. owensii) contain neither the d-Arg/d-Lys binding residues nor a BsrV-like locus./p> 0) or down (b < 0) the gradient./p>